Đức Gioan I sinh tại Senas miền Toscane nước Ý. Người ta chỉ biết ngài lên ngôi Giáo Hoàng ngày 13/08/523. Là một con người rất nhiệt thành, suốt đời ngài chỉ sống câu: “SỐNG VÌ DANH CHÚA”. Ngài rất có công trong việc hoàn tất điệu hát bình ca (chant grégorien) mà Ðức Cêlestinô I, Lêô Cả và Gêlase đã khởi xướng.

Năm 624, vua Justinô I bên Tiểu Á, muốn thống nhất Giáo Hội nên đàn áp nhóm lạc giáo Ariô và chiếm hữu các cơ sở tôn giáo của họ.

Tại Rôma, vua Thêôđôricô thuộc phái Ariô hay tin việc đàn áp này, liền nổi giận gửi tối hậu thư cho vua Justinô, nhưng không kết quả. Vua Thêôđôricô mới bắt Ðức Giáo Hoàng Gioan I làm con tin và buộc dẫn đầu đoàn sứ giả sang vua Justinô đòi trả lại tài sản và cho nhóm Ariô được tự do truyền đạo.

Ðã nhiều lần Đức Gioan I không chịu, nhưng sau cùng ngài chấp thuận đi. Lần đầu tiên trong lịch sử một Giáo Hoàng rời khỏi nước Ý. Khi Đức Giáo Hoàng Gioan I đến, toàn dân và vua Justinô hân hoan đón tiếp, và mời cử hành lễ Phục sinh tại thánh đường thánh Sôphia.

Mặc dù Đức Gioan I phải tuân lệnh vua Thêôđôricô đến gặp vua Justinô bên Tiểu Á, nhưng ngài không thỏa mãn ý muốn của hoàng đế được. Với cương vị một Giáo hoàng, phải bảo vệ đức tin chân chính của Hội thánh, làm sao ngài có thể đứng ra ngăn cản vua Justinô chống lại lạc giáo Ariô chối bỏ thiên tính của Đức Kitô. Thà chịu khổ hình còn hơn phản bội sứ mệnh Chúa giao phó.

Khi về lại Rôma, vua Thêôđôricô cho rằng Đức Giáo Hoàng Gioan I đã hành động ngược lại với mình, liền bắt giam ngài tại Ravenna, rồi bỏ đói cho đến khi chết. Ngài lìa trần ngày 18/05/526. Xác ngài được đưa về Rôma ngày 27/05/530 và chôn cất trong Vương Cung Thánh Đường Vatican.